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S02-105有机锡化合物的细胞毒性研讨 * 严雪婷，孙 婧，何 滨 ，江桂斌 （中国科学院生态环境研讨中心, 环境化学与生态毒理学国家重点试验室北京，100085 ） 有机锡化合物作为一类有机金属化合物，被大范围的使用于杀菌剂、杀虫剂、木材防腐剂、 [] 聚合物稳定剂和催化剂以及轮船防污剂 。作为现在已知内分泌搅扰物中仅有的金属化合物， 有机锡化合物可以引起某些生物的生殖逆向性改变。现在，已有文献报导，有机锡化合物可 [] 以和蛋白酶体相互作用，从而影响相关进程的蛋白表达，对生物体发生毒性 。 试验选取人肾上腺皮质癌细胞(H295R)作为露出细胞，该细胞能生成肾上腺组成的一切 类固醇激素，并与正常的人肾上腺细胞对外源化合物的反响共同，因而成为研讨内分泌搅扰 机制的抱负离体模型。H295 细胞培养至细胞呈梭形、丰满后进行有机锡化合物的露出， 将不同浓度(50ppb、100ppb、150ppb、200ppb 、300ppb) 的三丁基锡、三苯基锡和二丁基锡 以千分之一的体积比分别加入到培养基中，以等体积的甲醇作为对照组，对细胞进行24 小 时的避光露出。露出完毕后用甲醇氯仿法提取细胞蛋白，并贮存于-80℃。 二维凝胶电泳(2-DE)技能凭仗其高通量、高灵敏度、高分辨率和重复性好，已成为蛋 质组学研讨中最常用的蛋白质别离技能。2-DE 进行蛋白别离前，先运用 2D-quant 试剂盒进 行蛋白的定量测定，榜首贯等电聚集电泳所需的蛋白上样量为 350μg ；随后进行第二向聚丙 烯酰胺十二烷基硫酸钠凝胶电泳使蛋白得到别离；运用图画扫描仪获取 2-DE 图谱，运用软 件比较露出组和对照组电泳图谱中的差异蛋白质点，依据蛋白点在 2 倍以上上调或许 2 倍以 下下调的点为榜首选点标准，再结合图谱中胶点的深浅和巨细辨认选取差异表达的蛋白点； 使用基质辅佐激光解吸电离飞翔时间质谱(MALDI-TOF-MS)仪得到差异蛋白的相应肽质量 指纹谱(PMF)，并凭借Mascot 软件结合 NCBInr 数据库进行检索判定相关结构蛋白质。 经过对 2-DE 凝胶图谱的剖析，共有 703 个蛋白点被辨认，将对照组和露出组进行比对， 可以取得 17 个蛋白表达上调，36 个蛋白表达下调。经过对差异蛋白的质谱判定，终究得到 4 个上调蛋白和 8 个下调蛋白的相关结构信息。其间胶质细胞老练因子、巯醇蛋白酶和溶酶 体蛋白酶 Cathepsin B 与肿瘤的侵入和搬运相关；线粒体膜 ATP 合酶和过渡期内质网 ATP 酶参加 ATP 相关组成；热激蛋白可以保持蛋白的空间构象和生物活性；内质网蛋白和波形 蛋白可以保持细胞器稳态；硫氧化复原蛋白与细胞的氧化复原进程相关。综上，有机锡化合 物可以影响 H295 细胞激素的组成、氧化复原反响、蛋白的相关表达、以及细胞器和大分 子的拼装，由此发生细胞毒性。 基金项目：国家自然科学基金（No.） 参阅文献 [1]Fent, K., Ecotoxicology of organotin compounds. Crit Rev Toxicol, 1996. 26(1): p.1-117.
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